蛋白質(zhì)是藥物靶點的主要來源，其中，膜蛋白約占主要藥物靶點的50%。

膜蛋白的生物合成可以分為四個過程[1]：

①Targeting：新合成的蛋白質(zhì)運送到膜上特定位置；

②Insertion：跨膜結(jié)構(gòu)域 (TMD) 以適當?shù)耐負浣Y(jié)構(gòu)插入膜；

③Folding: 在膜中進行額外的折疊；

④Assembly：與其他元件組裝。

由于表達量低、構(gòu)象不穩(wěn)定、難分離純化等問題，重組膜蛋白表達成為膜蛋白靶向藥物開發(fā)的瓶頸。有報道稱，病毒樣顆粒 (VLP)以及無細胞蛋白表達（CFPS）正逐漸成為表達功能性膜蛋白的可行方法^[2]。

今天小編就為大家介紹這兩種膜蛋白表達的技術(shù)平臺。

圖1 膜蛋白生物合成過程示意圖^[1]

圖2 VLP展示膜蛋白示意圖

1.通過目標膜蛋白完整展示在VLP表面，能夠保證膜蛋白的完整天然構(gòu)象，適用于免疫和抗體篩選檢測的全長跨膜蛋白；

2.由于VLP的存在，VLP平臺表達的膜蛋白擁有更高的免疫原性[4]。

1. VLP仍然受到細胞內(nèi)表達膜蛋白的局限。

2. VLP出芽無法特異性地捕獲目標膜蛋白，因此所獲得的產(chǎn)品為混合物，純度低，不能用SDS-PAGE測定目標膜蛋白純度。

圖3 無細胞蛋白表達示意圖^[5]

1. 能夠?qū)崿F(xiàn)膜蛋白在上清中可溶表達，保證膜蛋白的穩(wěn)定性。

2. 可以進行下游純化，雜蛋白較少，純度可達80%。

無細胞系統(tǒng)表達膜蛋白表達無需傳統(tǒng)蛋白表達的載體轉(zhuǎn)染、菌株篩選等流程，也無需去垢劑溶膜，可直接構(gòu)建不同反應(yīng)體系篩選表達條件。在獲得滿足CFPS系統(tǒng)要求的模板DNA后，僅需1-3天即可表達膜蛋白，再經(jīng)過1-10天即可獲得純化的膜蛋白。

珀羅汀生物于2017年在蘇州工業(yè)園區(qū)成立，是一家專業(yè)的無細胞蛋白表達生物技術(shù)公司。目前珀羅汀已開發(fā)出可表達膜蛋白的無細胞蛋白表達試劑盒，同時依托無細胞平臺承接膜蛋白表達服務(wù)，推出“云上膜蛋白"活動，不表達不收費！

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珀羅汀生物基于無細胞蛋白表達系統(tǒng)的膜蛋白表達案例：